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詳見說明書 |
FS-016526 |
細胞培養操作規程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。
（3）與血管的進展和穩定有關。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
pGL4.40[luc2P MRE Hygro]
豬胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA Kit
包涵體中量純化試劑盒
pTB220
Sodium Carbonate Solution（碳酸鈉溶液）,0.5M,pH9.4
人毒休克綜合征1(TSST-1)ELISA Kit
Thioalkalivibrio halophilus medium
pET-5a(pET5a)(60908-2772)
小鼠凝血因子Ⅷ相關抗原(FⅧ-Ag)ELISA Kit
固相內劑（500g）
pSR2
Manganese Sulfate Solution（酸錳溶液）,0.5M
人B細胞瘤因子3(Bcl3)ELISA Kit
兔胃成纖維細胞偽原薯蕷皂苷 英文名稱：Pseudo protodioscin 規格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
歐當歸內酯A；歐當歸內酯 英文名稱：European Angelica lactone A; European Angelica lactone 規格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
毛地黃素 英文名稱：Digoxin 規格：：HPLC≥98% 10mg/支 保存：：-20℃，避光
安五脂素 英文名稱：Five lignans 規格：：HPLC≥98%20mg/支 保存：：-20℃，避光
α-倒捻子素、曼果斯廷;楝子素 英文名稱：Alpha mangostin, Man Huo J Tin; mangostin 規格：：HPLC≥98%20mg/支 保存：：-20℃，避光
東北貫眾素；東北貫眾素 英文名稱：Dryocrassin; dryocrassin 規格：：HPLC≥98% 10mg/支 保存：：-20℃，避光
綿馬酸ABA 英文名稱：Filixic acid ABA 規格：：HPLC≥98% 10mg/支 保存：：-20℃，避光
去甲異波爾定；去甲基異波爾定 英文名稱：To a different Pohl Pohl; to methyl isobutyl 規格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
石斛堿；石槲堿 英文名稱：Shi Hujian; Shi Mistletoe Alkali 規格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
白術內酯I;蒼術內酯I 英文名稱：Atractylenolide I; Atractylodes lactone I 規格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
白術內酯II;蒼術內酯II 英文名稱：Atractylenolide II; Atractylodes lactone II 規格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。